Мультиплексный одношаговый премикс RT-qPCR-UNG
Кат. номер: HCB5145A
Набор зондов Multiplex One Step RT-qPCR (UDG Plus) — это набор для мультиплексной количественной ПЦР на основе РНК в качестве матрицы.В процессе эксперимента обратная транскрипция и количественная ПЦР проводились в одной пробирке, что упрощало экспериментальную операцию и снижало риск контаминации.В этом наборе кДНК первой цепи эффективно синтезировалась с помощью термостойкой обратной транскриптазы и количественно амплифицировалась с помощью ДНК-полимеразы HotStart Tag.Набор в основном содержит оптимизированный буфер MP, смесь ферментов и т. д. Буферный раствор уже содержит Mg.2+и дНТФ.Кроме того, добавлены факторы, которые могут эффективно ингибировать неспецифическую амплификацию ПЦР и повышать эффективность амплификации нескольких реакций кПЦР, что может обеспечить эффективность амплификации и проводить вплоть до множественной реакции амплификации.Система dUTP/UDG была добавлена для эффективного предотвращения риска аэрозольного загрязнения.
Компоненты
1. Буфер
2. Ферментная смесь
Спецификация
| Горячий старт | Встроенный горячий старт. |
| Метод обнаружения | Обнаружение праймер-зонда |
| ПЦР-метод | Одношаговая RT-qPCR |
| Полимераза | ДНК-полимераза Taq |
| Тип образца | ДНК |
Условия хранения
Продукт поставляется с сухим льдом и может храниться при температуре -25~-15℃ в течение 1 года.Следует избегать частогозамораживание-оттаивание.Рекомендуется сохранить отдельно.
инструкции
1.Реакция Система
| Компоненты | Объем (мкл) | Окончательная концентрация |
| 2 × MP-буфер | 12,5 | 1× |
| Ферментная смесь | 1 | - |
| Смесь праймера и зонда (2,5 мкМ) | 3 | 0,3 мкм |
| Шаблонная РНК | 1-10 | - |
| H2O без РНКазы | до 25 | - |
Примечания:
Обязательно хорошо перемешайте перед использованием, избегайте образования чрезмерных пузырьков, вызванных сильной вибрацией.
а.Концентрация праймера: Смесь праймеров, включая мультиплексный праймер, в зависимости от ситуации оптимальная концентрация праймера может составлять от 0,1 до 1,0 мкМ.
б.Концентрация зонда: Смесь зондов, включая мультиплексную флуоресцентную группу с разницей в маркировке зондов. В зависимости от ситуации оптимальная концентрация зонда может составлять от 0,05 до 0,5 мкм.
в.Разбавление матрицы: qPCR очень чувствителен, поэтому рекомендуется разбавлять матрицу.Значение контрольного Ct подходит для диапазона от 20 до 35.
д.Подготовка системы: Подготовьте на сверхчистом рабочем столе, пипетке и реакционной пробирке без остатков нуклеазы;рекомендуется использовать головку пистолета с фильтрующим элементом.Избегайте перекрестного загрязнения и аэрозольного загрязнения.
2. Оптимизированная езда на велосипедеПротокол
| Цикл шаг | Темп. | Время | Циклы |
| Обратная транскрипция | 50℃а | 20 минут | 1 |
| Начальная денатурация | 95℃ | 5 минут | 1 |
| Реакция амплификации | 95℃ | 15 секунд |
40-45 |
| 60℃ b | 30 секунд c |
Примечания:
а.Обратная транскрипция:Температуру можно выбрать 42°C или 50°C.
б.Реакция амплификации: Температуру регулируют в соответствии со значением Tm разработанных праймеров.
в.Получение сигнала флуоресценции: установите процедуру эксперимента в соответствии с требованиями руководства к прибору.
Примечания
Пожалуйста, надевайте необходимые средства индивидуальной защиты, такие как лабораторный халат и перчатки, чтобы обеспечить свое здоровье и безопасность.
