ДНК-полимераза Robustart Taq

ДНК-полимераза Robustart Taq представляет собой ДНК-полимеразу с горячим стартом.Этот продукт может не только лучше ингибировать неспецифическую реакцию, вызванную неспецифическим отжигом праймеров или агрегацией праймеров в процессе подготовки и амплификации системы ПЦР.Таким образом, он обладает превосходной специфичностью и более эффективен для амплификации матриц с низкой концентрацией, а также подходит для реакции амплификации мультиплексной ПЦР.Более того, этот продукт имеет очень хорошую применимость, и стабильные результаты амплификации можно получить в различных типах ПЦР-реакций.

Компоненты

1.5 ЕД/мкл ДНК-полимеразы Robustart Taq

2.10 × ПЦР-буфер II (без Mg²+) (опционально)

3.25 мМ MgCl₂(необязательный)

* 10 × ПЦР-буфер II (без Mg²+) не содержит dNTP и Mg²+, добавьте dNTP и MgCl.₂при приготовлении реакционной системы.

Рекомендуемые приложения

1.Быстрое усиление.

2.Многократное усиление.

3.Прямая амплификация крови, мазков и других образцов.

4.Выявление респираторных заболеваний.

Условия хранения

-20°C для длительного хранения, перед использованием следует тщательно перемешать, избегать частого замораживания-оттаивания.

*Если осадок выпадает после охлаждения, это нормально;Перед смешиванием и использованием рекомендуется довести температуру до комнатной.

Определение единицы измерения

Одна активная единица (Е) определяется как количество фермента, которое включает 10 нмоль дезоксирибонуклеотида в нерастворимый в кислоте материал при 74°C в течение 30 минут с использованием активированной ДНК спермы лосося в качестве матрицы/праймера.

Контроль качества

1.Электрофоретическая чистота SDS-PAGE более 98%.

2.Чувствительность усиления, контроль от партии к партии, стабильность.

3.Нет экзогенной нуклеазной активности, нет экзогенной эндонуклеазы или загрязнения экзонуклеазой.

инструкции

Настройка реакции

Примечания:

1) а.Буфер не содержит dNTP и Mg²+, добавьте dNTP и MgCl.₂при приготовлении реакционной системы.

2) б.При использовании для qPCR/qRT-PCR в реакционную систему следует добавить флуоресцентные зонды.Обычно конечная концентрация праймера 0,2 мкМ дает хорошие результаты;если эффективность реакции плохая, концентрацию праймера можно регулировать в диапазоне 0,2-1 мкМ.Концентрация зонда обычно оптимизируется в диапазоне 0,1-0,3 мкМ.Можно провести эксперименты с градиентом концентрации, чтобы найти наилучшую комбинацию праймера и зонда.

Протокол термоциклирования

Примечания

1.Скорость амплификации быстрой ДНК-полимеразы не должна быть менее 1 т.п.н./10 с.Скорость повышения и падения температуры, режим контроля температуры и эффективность теплопроводности различных инструментов ПЦР сильно различаются, поэтому рекомендуется оптимизировать оптимальные условия реакции для конкретного инструмента быстрой ПЦР.

2.Система легко адаптируется, обладает более высокой специфичностью и чувствительностью.

3.Подходит для использования в качестве высокочувствительных реагентов для ПЦР-детектирования и может использоваться в реакциях мультиплексной ПЦР-амплификации.

4.5'→3'-полимеразная активность, 5'-→3'-экзонуклеазная активность;нет 3'→5'-экзонуклеазной активности;нет функции корректуры.

5.Подходит для качественного и количественного тестирования ПЦР и RT-PCR.

6.3'-конец продукта ПЦР представляет собой А, который можно напрямую клонировать в Т-вектор.

7.Трехэтапный метод рекомендуется для праймеров с низкими температурами отжига или для амплификации фрагментов длиной более 200 п.н.