2 × HiF Taq плюс Мастер-микс
Кат. номер: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (с красителем) представляет собой готовый к использованию двукратный предварительно смешанный раствор, содержащий ДНК-полимеразу Plus HIF, dNTP и оптимизированный буфер.Два моноклональных антитела при комнатной температуре, которые ингибируют активность полимеразы и активность 3'→5'-экзонуклеазы, добавляются в мастер-микс для простой и высокоспецифичной ПЦР с горячим стартом.Фактор расширения добавляется в мастер-микс, чтобы придать ферменту способность амплификации длинных фрагментов, длина амплификации может достигать 13 т.п.н., фермент обладает 5'→3' ДНК-полимеразной активностью и 3'→5' экзонуклеазной активности, ее точность в 83 раза выше, чем у Taq ДНК-полимеразы, что в 9 раз выше, чем у обычной ДНК-полимеразы.Подходит для усиления сложных шаблонов, продукт усиления имеет тупой конец.
2 × HIF Taq plus Master Mix (с красителем) обладает такими преимуществами, как быстрота и простота, высокая чувствительность, высокая специфичность, хорошая стабильность и т. д., в реакционную систему требуется только добавление праймеров и шаблонов, и ее можно амплифицировать с помощью двух- пошаговый протокол, упрощающий экспериментальные этапы и экономящий время.Этот продукт содержит индикаторные красители для электрофореза, а продукты ПЦР можно использовать непосредственно для электрофореза.Кроме того, продукт также содержит специальный защитный агент, благодаря чему мастер-микс может сохранять стабильную активность после многократного замораживания-оттаивания.
Условия хранения
Продукты следует хранить при температуре -25~-15℃ в течение 1 года.
Технические характеристики
| Спецификации продукта | Мастер Микс |
| Концентрация | 2× |
| Горячий старт | Встроенный горячий старт |
| Свес | Тупой |
| Скорость реакции | Стремительный |
| Размер (конечный продукт) | до 13кб |
| Условия перевозки | Сухой лед |
| Тип продукта | Высокоточные премиксы для ПЦР |
инструкции
1.Система реакции ПЦР
| Компоненты | Объем (мкл) |
| Шаблон ДНК | Подходящий |
| Форвард-праймер (10 мкмоль/л) | 2,5 |
| Обратный праймер (10 мкмоль/л) | 2,5 |
| 2×HIF Так плюс Мастер Микс | 25 |
| ддх2O | до 50 |
2.Рекомендуемое использование различных шаблонов
| Тип шаблона | Усиливайте фрагменты от 1 КБ до 10 КБ. |
| Геномная ДНК | 50 нг-200 нг |
| Плазмидная или вирусная ДНК | 10пг-20нг |
| кДНК | 1–2,5 мкл (не более 10 % от конечного объема ПЦР-реакции) |
3.Протокол усиления
1) Двухэтапный протокол (шаблон сложности)
| Шаг цикла | Темп. | Время | Циклы |
| Начальная денатурация | 98℃ | 3 мин. | 1 |
| Денатурация | 98℃ | 10 секунд | 30-35 |
| Расширение | 68℃ | 30 сек/кб | |
| Окончательное продление | 72℃ | 5 мин | 1 |
2) Трехэтапный протокол (обычный протокол)
| Шаг цикла | Темп. | Время | Циклы |
| Начальная денатурация | 98℃ | 3 мин. | 1 |
| Денатурация | 98℃ | 10 секунд | 30-35 |
| Отжиг | 60℃ | 20 секунд | |
| Расширение | 72℃ | 30 сек/кб | |
| Окончательное продление | 72℃ | 5 мин | 1 |
3) Протокол градиента отжига (шаблон сложности)
| Шаг цикла | Температура | Время | Циклы |
| Начальная денатурация | 98℃ | 3 мин. | 1 |
| Денатурация | 98℃ | 10 секунд | 15 (Снижение на 1 ℃ за цикл) |
| Градиентный отжиг | 70-55℃ | 20 секунд | |
| Расширение | 72℃ | 30 сек/кб | |
| Денатурация | 98℃ | 10 секунд |
20 |
| Отжиг | 55℃ | 20 секунд | |
| Расширение | 72℃ | 30 сек/кб | |
| Окончательное продление | 72℃ | 5 мин | 1 |
Возможности в рамках другого протокола усиления
| Протокоl | Два шага | Трехшаговый | Градиентный отжиг |
| Спец. | быстрый | середина | медленный |
| Специфика | высокий | середина | высокий |
| Выход ПЦР | середина | высокий | середина |
| Скорость обнаружения | высокий | середина | высокий |
Примечания
Пожалуйста, надевайте необходимые средства индивидуальной защиты, такие как лабораторный халат и перчатки, чтобы обеспечить свое здоровье и безопасность!
