ДНК-полимераза Wild Taq
ДНК-полимераза Taq представляет собой термостабильную ДНК-полимеразу Thermus aquaticus YT-1, которая обладает 5'→3'-полимеразной активностью и эндонуклеазной активностью 5'-клапана.
Компоненты
| Компонент | HC1010А-01 | HC1010А-02 | HC1010А-03 | HC1010А-04 |
| 10× Так-буфер | 2×1 мл | 2×10 мл | 2×50 мл | 5×200 мл |
| ДНК-полимераза Taq (5 ЕД/мкл) | 0,1 мл | 1 мл | 5 мл | 5×10 мл |
Условия хранения
Транспортировать при температуре 0°C и хранить при температуре -25°C~-15°C.
Определение единицы измерения
Одна единица определяется как количество фермента, которое включает 15 нмоль dNTP в нерастворимый в кислоте материал за 30 минут при 75°C.
Контроль качества
1.Анализ чистоты белка (SDS-PAGE):Чистота ДНК-полимеразы Taq составляла ≥95%, что определялось анализом SDS-PAGE.
2.Endонуклеазная активность:Минимум 5 ед. ДНК-полимеразы Taq с 1 мкг λДНК в течение 16 часов при 37 ℃ не приводит к заметному разрушению, как определено.
3.Экзонуклеазная активность:Минимум 5 ед. ДНК-полимеразы Taq с 1 мкг λ-Hind Ⅲ переваривают ДНК в течение 16 часов при 37 ℃, что не приводит к обнаружению деградации, как определено.
4.Никейская активность:Минимум 5 ед. ДНК-полимеразы Taq с 1 мкг ДНК pBR322 в течение 16 часов при 37°C не приводит к обнаружению деградации, как было определено.
5.РНКазная активность:Минимум 5 ед. ДНК-полимеразы Taq с 1,6 мкг РНК MS2 в течение 16 часов при 37°C не приводит к обнаружению деградации, как определено.
6.кишечная палочкаДНК:5 ед. ДНК-полимеразы Taq проверяют на наличие геномной ДНК E. coli с использованием TaqMan qPCR с праймерами, специфичными для локуса 16S рРНК E. coli.Загрязнение геномной ДНК E. coli составляет менее 1 копии.
7.ПЦР-амплификация (лямбда-ДНК 5,0 т.п.н.)- Реакция объемом 50 мкл, содержащая 5 нг лямбда-ДНК с 5 единицами ДНК-полимеразы Taq для 25 циклов ПЦР-амплификации, приводит к ожидаемому продукту размером 5,0 т.п.н.
Настройка реакции
| Компоненты | Объем |
| ДНК шаблонаa | необязательный |
| 10 мкМ Форвард Праймер | 1 мкл |
| 10 мкМ обратный праймер | 1 мкл |
| Смесь дНТФ (по 10 мМ каждый) | 1 мкл |
| 10 × Taq-буфер | 5 мкл |
| ДНК-полимераза Taqб | 0,25 мкл |
| Безнуклеазная вода | До 50 мкл |
Примечания:
1) Оптимальная реакционная концентрация разных шаблонов различна.В следующей таблице показано рекомендуемое использование шаблона для реакционной системы объемом 50 мкл.
| ДНК | Количество |
| геномный | 1 нг-1 мкг |
| Плазмида или вирус | 1 пг-1 нг |
2) Оптимальная концентрация ДНК-полимеразы Taq может варьироваться от 0,25 мкл до 1 мкл в специализированных приложениях.
РеакцияПрограмма
| Шаг | Температура(°С) | Время | Циклы |
| Начальная денатурацияa | 95 ℃ | 5 минут | - |
| Денатурация | 95 ℃ | 15-30 с | 30-35 циклов |
| Отжигб | 60 ℃ | 15 с | |
| Расширение | 72 ℃ | 1кб/мин | |
| Окончательное продление | 72 ℃ | 5 минут | - |
Примечания:
1) Начальные условия денатурации подходят для большинства реакций амплификации и могут быть изменены в зависимости от сложности структуры матрицы.Если структура шаблона сложная, время предварительной денатурации можно увеличить до 5–10 минут, чтобы улучшить первоначальный эффект денатурации.
2) Температуру отжига необходимо регулировать в соответствии со значением Tm праймера, которое обычно устанавливается на 3–5 ℃ ниже значения Tm праймера;Для сложных шаблонов необходимо регулировать температуру отжига и увеличивать время растяжения для достижения эффективного усиления.
