Superstart qPCR Premix plus-UNG
Кат. номер: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG — это специализированный реагент, предназначенный для качественных и количественных реакций ПЦР в реальном времени с использованием зондового обнаружения, разработанный специально для процессов лиофилизации.Он содержит новый фермент горячего старта Hotstart Taq plus (DG), активность фермента Taq которого сохраняется при комнатной температуре, эффективно ингибируя неспецифическую амплификацию, вызванную неспецифическим отжигом праймера или образованием димера праймера в условиях низкой температуры, тем самым улучшая специфичность реакции амплификации.В этом реагенте используется оптимизированный специальный буфер для qPCR и система защиты от загрязнений UNG/dUTP, обеспечивающая быстрый «горячий старт», что значительно повышает эффективность и чувствительность реакций qPCR.Он может получать хорошие стандартные кривые в широком диапазоне областей количественного анализа и точно выполнять количественный анализ, эффективно предотвращая ложноположительную амплификацию, вызванную остаточными продуктами ПЦР или аэрозольным загрязнением.Этот реагент совместим с большинством флуоресцентных инструментов для количественной ПЦР таких производителей, как Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad и Roche и т. д., и демонстрирует хорошую стабильность в лиофилизированной форме.
Реагентный состав
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (мг2+бесплатно) (ДГ)
2. 250 мМ MgCl.2
3. 4×лиопротектор (по желанию)
Условия хранения
Длительное хранение при -20℃;можно хранить при температуре 4 ℃ до 3 месяцев.Перед использованием хорошо перемешайте иизбегать многократного замораживания и оттаивания.
Велосипедный протокол
| Процедура | Темп. | Время | Цикл |
| Пищеварение | 50℃ | 2 мин | 1 |
| Активация полимеразы | 95℃ | 1~5 мин. | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 10~20 с | 40-50 |
| Отжиг и удлинение | 56~64℃ | 20~60 с | 40-50 |
Система жидкостной реакции qPCRПодготовка стебля
|
Состав |
Объем 25 мкл |
Объем 50 мкл |
Окончательная концентрация |
| 5×HotstartPremix плюс-UNG(мг2+бесплатно) (ДГ) | 5 мкл | 10 мкл | 1× |
| 250 мМ MgCl2 | 0,45 мкл | 0,9 мкл | 4,5 мм |
| 4×лиопротектор1 | 6,25 мкл | 12,5 мкл | 1× |
| 25×смесь праймер-зонд2 | 1 мкл | 2 мкл | 1× |
| ДНК шаблона3 | —— | —— | —— |
| ддх2O | До 25 мкл | До 50 мкл | —— |
1. Конечная концентрация праймеров 0,2 мкм обычно дает хорошие результаты;если реакция плохая, при необходимости отрегулируйте концентрацию праймера в диапазоне 0,2–1 мкм.Концентрацию зонда обычно оптимизируют в диапазоне 0,1–0,3 мкм посредством градиентных экспериментов для поиска оптимальных комбинаций.
2. Число копий генов-мишеней, содержащихся в разных типах матриц, различается;при необходимости можно выполнить градиентное разбавление для определения оптимального количества добавляемого шаблона.
3. Эту систему можно лиофилизировать;когда клиенты используют эту систему без требований к лиопротектору, можно выборочно добавить 4 × лиопротектора; если требуются лиофилизированные продукты, на этапе проверки эффективности продукта с жидкими реагентами необходимо добавить 4 × лиопротектора, чтобы обеспечить согласованность с лиофилизированными компонентами системы. и эффекты.
Когда система используетсяd для сублимационной сушки подготовьте система as следующий:
| Состав | 25мкл Реакционная система |
| 5 ×HotstartPremix плюс-UNG (мг2+бесплатно) (ДГ) | 5 мкл |
| 250 мМ MgCl2 | 0,45 мкл |
| 4×лиопротектор | 6,25 мкл |
| 25×смесь праймер-зонд | 1 мкл |
| ддх2O | До 18~20мкл |
* Если необходимы другие системы сублимационной сушки, проконсультируйтесь отдельно.
Процесс лиофилизацииss
| Процедура | Темп. | Время | Состояние | Давление |
| Предварительное замораживание | 4℃ | 30 минут | Держать |
1 атм |
| -50℃ | 60 мин. | Охлаждение | ||
| -50℃ | 180 мин. | Держать | ||
| Первичная сушка | -30℃ | 60 мин. | Обогрев |
Абсолютный вакуум |
| -30℃ | 70 мин. | Держать | ||
| Вторичная сушка | 25℃ | 60 мин. | Обогрев |
Абсолютный вакуум |
| 25℃ | 300 мин. | Держать |
2. Описанный выше процесс лиофилизации предназначен только для справки.Различные типы продуктов и разные сублимационные сушилки имеют разные параметры, поэтому можно вносить корректировки в соответствии с фактическими потребностями.условия во время использования.
3. Различные процессы лиофилизации могут подходить для разных размеров партий лиофилизированных продуктов.продуктов, поэтому при их использовании в крупномасштабном производстве необходимо провести достаточную проверку испытаний.
Инструкция по применению лиофилизатад порошок
1. Кратковременно центрифугируйте лиофилизированный порошок;
2. Добавьте матрицу нуклеиновой кислоты к лиофилизированному порошку и добавьте воды до 25 мкл;
3. Хорошо перемешайте центрифугированием и прогоните на машине.
Контроль качества:
1. Функциональное тестирование: чувствительность, специфичность, воспроизводимость кПЦР.
2. Отсутствие экзогенной нуклеазной активности, отсутствие экзогенной эндо/экзонуклеазной контаминации.
Техническая информация:
1. В Superstart qPCR Premix plus-UNG используется новый фермент горячего старта, который обеспечивает быстрый горячий старт в течение 1–5 минут;благодаря специальному составу буфера он подходит для мультиплексных флуоресцентных количественных реакций ПЦР.
2. Он имеет более высокую специфичность, что значительно повышает чувствительность определения предела количественной ПЦР флуоресценции, что обеспечивает нормализацию кривых амплификации, значение флуоресценции получает очевидное улучшение при шаблонах с низкой концентрацией, подходит в качестве высокочувствительных реагентов для количественного обнаружения ПЦР флуоресценции.
3. Для праймеров с более низкой температурой отжига или фрагментов длиной более 200 п.о. рекомендуется трехэтапный метод.
4. Эффективность использования dUTP и чувствительность к ферменту UNG различаются для разных генов-мишеней, поэтому, если использование системы UNG приводит к снижению чувствительности обнаружения, реакционную систему следует скорректировать и оптимизировать.Если требуется техническая поддержка, пожалуйста, свяжитесь с нашей компанией.
5. Используйте специальные зоны и пипетки до и после амплификации, надевайте перчатки во время работы и часто заменяйте их;не открывайте реакционную пробирку после завершения ПЦР, чтобы свести к минимуму загрязнение образцов продуктами ПЦР.
