RT-LAMP Колорометрический мастер-микс HCB5204A
Этот продукт содержит реакционный буфер, смесь RT-ферментов (Bst ДНК-полимераза и термостойкая обратная транскриптаза), лиофилизированные защитные вещества и компоненты хромогенных красителей.Для использования просто используйте буфер, реакционный фермент и праймер смешиваются и добавляются к матрице;добавление лиофилизированного защитного средства может быть прямым.Его подключали к лиофилизатору и лиофилизировали, при использовании добавляли только праймеры и матрицы.Этот набор обеспечивает быстрое и четкое визуальное обнаружение амплификации, отрицательная реакция которой обозначается красным цветом, а положительная реакция обозначается изменением цвета на желтый.
Компонент
| Компонент | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Буфер петлевой амплификации (с красителем) | 0,96 мл | 4,80 мл×2 | 9,60 мл×10 |
| Смесь RT-ферментов | 270 мкл | 2,70 мл | 2,70 мл×10 |
| Лиофилизированный защитник | 0,96 мл×2 | 9,60 мл×2 | 9,60 мл×20 |
Приложения
Для изотермической амплификации ДНК или РНК.
Условия хранения
Транспортируется сухим льдом, хранится при температуре -25~-15℃.Избегайте частого замораживания-оттаивания, срок годности продукта составляет 12 месяцев.
Протокол
1.Разморозьте реакционный буфер, который будет использоваться, при комнатной температуре.Ненадолго перемешайте или переверните пробирки несколько раз, чтобы тщательно перемешать, затем центрифугируйте, чтобы собрать жидкость на дно пробирки.
2.Приготовление реакционной системы.Этот реагент можно приготовить в двух реакционных системах: жидкой реакционной смеси и лиофилизированной системной смеси.
1) Приготовьте жидкую реакционную смесь.
| Компонент | Объем |
| Буфер петлевой амплификации (с красителем) | 10 мкл |
| Смесь RT-ферментов | 2,8 мкл |
| 10 × Праймер-миксa | 5 мкл |
| Шаблоны ДНК/РНК b | × мкл |
| Безнуклеазная вода | До 50 мкл |
2) Смесь системы лиофилизации
① Приготовьте лиофилизированную смесь.
| Компонент | Объем |
| Буфер петлевой амплификации (с красителем) | 10 мкл |
| Лиофилизированный защитник | 20 мкл |
| Смесь RT-ферментов | 2,8 мкл |
| Безнуклеазная вода | До 50 мкл |
② Лиофилизация: приготовленную смесь лиофилизовали в системе объемом 50 мкл.
③ Приготовьте реакционную смесь.
| Компонент | Объем |
| Лиофилизированная смесь | 1 кусок |
| 10 × Праймер-миксa | 5 мкл |
| Шаблоны ДНК/РНК b | × мкл |
| Безнуклеазная вода | До 50 мкл |
Примечания:
1) а.10 × смесь праймеров: 16 мкМ FIP/BIP, 2 мкМ F3/B3, 4 мкМ Loop F/B;
2) б.DEPC (водорастворимый) рекомендуется для образцов нуклеиновых кислот.
1.Инкубируйте при 65°C в течение 30–45 минут, которые можно продлить в зависимости от времени реакции на изменение цвета.
2.Невооруженным глазом желтый был положительным, а красный — отрицательным.
Примечания
1.На дне буферной пробирки может появиться соль; кратковременно перемешайте ее на встряхивании или несколько раз переверните пробирки для тщательного перемешивания при комнатной температуре.
2.Температуру реакции можно оптимизировать от 62 ℃ до 68 ℃ в зависимости от состояния праймеров.
3.Упакованные реагенты не должны подвергаться длительному воздействию воздуха.
4.Реакция изменения цвета на красный и желтый зависит от изменения pH реакционной системы. Не используйте раствор для хранения трис-нуклеиновой кислоты, рекомендуется использовать ddH.2O запасенная нуклеиновая кислота;
5.Эксперимент должен быть стандартизирован, включая подготовку реакционной системы, лиофилизацию, обработку образцов и процесс добавления образцов;
6.Во избежание загрязнения рекомендуется готовить реакционную систему на сверхчистом стенде, в других случаях добавлять шаблоны в вытяжной шкаф помещения во избежание ложноположительных помех.
