Ингибитор РНКазы (без глицерина)
Ингибитор мышиной РНКазы представляет собой рекомбинантный ингибитор мышиной РНКазы, экспрессированный и очищенный из E.coli.Он связывается с РНКазой A, B или C в соотношении 1:1 посредством нековалентной связи, тем самым ингибируя активность трех ферментов и защищая РНК от деградации.Однако он не эффективен против РНКазы 1, РНКазы Т1, нуклеазы S1, РНКазы H или РНКазы Aspergillus.Ингибитор мышиной РНКазы был протестирован с помощью RT-PCR, RT-qPCR и IVT мРНК и был совместим с различными коммерческими обратными транскриптазами, ДНК-полимеразами и РНК-полимеразами.
По сравнению с ингибиторами РНКазы человека, ингибитор РНКазы мыши не содержит двух цистеинов, которые очень чувствительны к окислению, что приводит к инактивации ингибитора.Это делает его стабильным при низких концентрациях ДТТ (менее 1 мМ).Эта особенность делает его подходящим для использования в реакциях, где высокие концентрации DTT неблагоприятны для реакции (например, ОТ-ПЦР в реальном времени).
Aзаявление
Этот продукт можно широко использовать в любых экспериментах, где возможно вмешательство РНКазы во избежание деградации РНК, например:
1. Синтез первой цепи кДНК, RT-PCR, RT-qPCR и т. д.;
2.Защита РНК от деградации при транскрипции/трансляции in vitro (например, репликация вируса in vitro);
3. Ингибирование активности РНКазы при выделении и очистке РНК.
Условия хранения
Хранить при температуре -25～-15℃;
Циклы замораживания-оттаивания ≤ 5 раз;
Действителен в течение 1 года.
Определение единицы измерения
Одна единица определяется как количество ингибитора РНКазы, необходимое для ингибирования активности 5 нг РНКазы А на 50%.
Молекулярная масса
Ингибитор РНКазы (без глицерина) представляет собой белок массой 50 кДа.
Контроль качества
Экзонуклеаза Активность:
Инкубация 40 ед. фермента с 1 мкг ДНК, расщепленной λ-Hind III, в течение 16 часов при 37°C не приводила к заметной деградации ДНК, что определялось с помощью гель-электрофореза.
Эндонуклеазная активность:
Инкубация 40 ед. фермента с 1 мкг λ-ДНК в течение 16 часов при 37°С не приводила к заметному разрушению ДНК, что определялось с помощью гель-электрофореза.
Никинг Активность:
Инкубация 40 ЕД фермента с 1 мкг pBR322 в течение 16 часов при 37 ℃ не привела к заметному разрушению ДНК, что определялось с помощью гель-электрофореза.
РНКаза Активность:
Инкубация 40 ЕД фермента с 1,6 мкг РНК MS2 в течение 4 часов при 37 ℃ не привела к заметной деградации РНК, что определялось с помощью гель-электрофореза.
E.ДНК кишечной палочки:
40 ЕД фермента обнаруживают с помощью TaqMan qPCR.ДНК E.coli составляет ≤ 0,1 пг/40 ед.
Nотметитьs
1. Не встряхивайте и не перемешивайте сильно, чтобы предотвратить инактивацию ферментов.
2. Ингибитор РНКазы активен при температуре от 25 ℃ до 55 ℃ и инактивируется при температуре ≥65 ℃.
3. Активность РНКазы H, РНКазы 1 и РНКазы Т1 не ингибируется.
4. Диапазон pH ингибирования активности РНКазы широк (активен при pH 5-9), максимальная активность проявляется при pH 7-8.
