ДНКаза I (без РНКазы) (5 ед./мкл)
Кат. номер: HC4007A
ДНКаза I (дезоксирибонуклеаза I) представляет собой эндодезоксирибонуклеазу, которая может расщеплять одно- или двухцепочечную ДНК.Он распознает и расщепляет фосфодиэфирные связи с образованием монодезоксинуклеотидов или одно- или двухцепочечных олигодезоксинуклеотидов с фосфатными группами на 5'-конце и гидроксильной группой на 3'-конце.Активность ДНКазы I зависит от Са2+и может быть активирован ионами двухвалентных металлов, таких как Mn2+и цинк2+.5 мМ Са2+защищает фермент от гидролиза.В присутствии мг2+Фермент мог случайным образом распознавать и расщеплять любой участок любой цепи ДНК.В присутствии Мн2+двойные цепи ДНК могут одновременно распознаваться и расщепляться практически в одном и том же сайте с образованием фрагментов ДНК с плоскими концами или фрагментов ДНК с липкими концами с выступающими 1-2 нуклеотидами.
Компоненты
| Имя | 0,1КУ | 1КУ | 5 КУ | 50 КУ |
| ДНКаза I, без РНКазы | 20 мкл | 200 мкл | 1мл | 10 мл |
| 10 × буфер ДНКазы I | 1мл | 1мл | 5 × 1 мл | 5 ×10 мл |
Условия хранения
-25℃~-15℃ для хранения;Транспортировка под пакетами льда.
инструкции
1. Приготовьте реакционный раствор в пробирке без РНКазы в соответствии с указанными ниже пропорциями:
| Компонент | Объем |
| РНК | Х мкг |
| 10 × буфер ДНКазы I | 1 мкл |
| ДНКаза I, без РНКазы (5 ед./мкл) | 1 ЕД на мкг РНК① |
| ддх2O | До 10 мкл |
Примечание. ① Рассчитайте объем ДНКазы I, который необходимо добавить, исходя из количества РНК.
2. 37 ℃ в течение 15 минут;
3. Добавьте 0,5 М ЭДТА до конечной концентрации 2,5–5 мМ и нагревайте при 65 ℃ в течение 10 минут, чтобы остановить реакцию.Образец можно напрямую использовать для следующей реакции, например, обратной транскрипции.эксперимент.
Определение единицы измерения
Одна единица определяется как количество фермента, которое полностью разложит 1 мкг pBR322.ДНК за 10 минут при 37℃.
Контроль качества
РНКаза:5 ед. ДНКазы I с 1,6 мкг РНК MS2 в течение 4 часов при 37 ℃ не приводят к деградации, посколькуопределяют электрофорезом в агарозном геле.
Примечания
1. Пожалуйста, приготовьте 0,5 МЕДТА самостоятельно.
2. Используйте 1U ДНКазы I на мкг РНК.Однако если РНК меньше 1 мкг, используйте ДНКазу I в дозе 1 ед.
3. Во время работы поместите фермент на лед.
