ДНК-полимераза Bst 2.0 (без глицерина)
ДНК-полимераза Bst V2 получена из ДНК-полимеразы I Bacillus stearothermophilus, которая обладает 5'→3' ДНК-полимеразной активностью и сильной активностью замены цепи, но не имеет экзонуклеазной активности 5'→3'.ДНК-полимераза Bst V2 идеально подходит для смещения цепи, изотермической амплификации LAMP (петлевая изотермическая амплификация) и быстрого секвенирования.
Компоненты
| Компонент | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstДНКполимераза V2 (без глицерина) (8 ЕД/мкл) | 0,2 мл | 1 мл | 10 мл |
| 10 × буфер HC Bst V2 | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 3×10 мл |
| MgSO4(100 мМ) | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 2×10 мл |
Приложения
1. Изотермическое усиление LAMP
2. Реакция одиночного смещения цепи ДНК.
3. Секвенирование генов с высоким содержанием GC.
4.Секвенирование ДНК нанограммного уровня.
Условия хранения
Транспортировать при температуре 0°C и хранить при температуре -25°C~-15°C.
Определение единицы измерения
Одна единица определяется как количество фермента, которое включает 25 нмоль dNTP в нерастворимый в кислоте материал за 30 минут при 65°C.
Контроль качества
1.Анализ чистоты белка (SDS-PAGE):Чистота ДНК-полимеразы Bst V2 составляет ≥99%, что определяется анализом SDS-PAGE с использованием обнаружения Coomassie Blue.
2.Экзонуклеазная активность:Инкубация 50 мкл реакционной смеси, содержащей минимум 8 ед. ДНК-полимеразы Bst V2, с 1 мкг ДНК гидролизата λ-Hind Ⅲ в течение 16 часов при 37 ℃ не приводит к заметному разложению, как было определено.
3.Никейская активность:Инкубация 50 мкл реакционной смеси, содержащей минимум 8 ед. ДНК-полимеразы V2 Bst, с 1 мкг ДНК pBR322 в течение 16 часов при 37°C не приводит к заметному разложению, как было установлено.
4.РНКазная активность:Инкубация 50 мкл реакционной смеси, содержащей минимум 8 ед. ДНК-полимеразы Bst V2, с 1,6 мкг РНК MS2 в течение 16 часов при 37°C, как установлено, не приводит к заметному разложению.
5.ДНК кишечной палочки:120 ед. ДНК-полимеразы V2 Bst проверяют на наличие геномной ДНК E. coli с использованием TaqMan qPCR с праймерами, специфичными для локуса 16S рРНК E. coli.Загрязнение геномной ДНК E. coli составляет менее 1 копии.
Реакция ЛАМПЫ
| Компоненты | 25мкл |
| 10 × буфер HC Bst V2 | 2,5 мкл |
| MgSO4 (100 мМ) | 1,5 мкл |
| дНТФ (по 10 мМ каждый) | 3,5 мкл |
| SYTO™ 16 Зеленый (25 ×)a | 1,0 мкл |
| Праймерная смесьb | 6 мкл |
| ДНК-полимераза Bst V2 (без глицерина) (8 ЕД/мкл) | 1 мкл |
| Шаблон | × мкл |
| ddH₂O | До 25 мкл |
Примечания:
1) а.SYTOTM 16 Green (25×): В зависимости от экспериментальных потребностей в качестве заменителей можно использовать другие красители;
2) б.Смесь праймеров: получена путем смешивания 20 мкМ FIP, 20 мкМ BIP, 2,5 мкМ F3, 2,5 мкМ B3, 5 мкМ LF, 5 мкМ LB и других объемов.
Реакция и состояние
1 × буфер HC Bst V2, температура инкубации от 60°C до 65°C.
Тепловая инактивация
80 °C, 20 минут
