ДНК-полимераза Warm Start Bst 2.0 (без глицерина)

ДНК-полимераза Bst V2 получена из ДНК-полимеразы I Bacillus stearothermophilus, которая обладает 5'→3' ДНК-полимеразной активностью и сильной активностью замены цепи, но не имеет экзонуклеазной активности 5'→3'.ДНК-полимераза Bst V2 идеально подходит для смещения цепи, изотермической амплификации LAMP (петлевая изотермическая амплификация) и быстрого секвенирования.ДНК-полимераза Bst V2 представляет собой версию с горячим стартом, основанную на ДНК-полимеразе Bst V2 (HC5005A), полученной с помощью технологии обратимой модификации, которая может ингибировать активность ДНК-полимеразы при комнатной температуре, поэтому реакционную систему можно эксплуатировать и готовить при комнатной температуре, чтобы предотвратить -специфическая амплификация и повышение эффективности реакции, и эту версию можно лиофилизировать.Кроме того, его активность проявляется при высоких температурах, поэтому нет необходимости в отдельном этапе активации.

Компоненты

ДНК-полимераза Bst V2 (без глицерина) (8 ЕД/мкл)

Приложения

1.Изотермическое усиление LAMP

2.Реакция одиночного замещения цепи ДНК

3.Секвенирование генов с высоким содержанием GC

4.Секвенирование ДНК нанограммного уровня.

Условия хранения

Транспортировать при температуре 0°C и хранить при температуре -25°C~-15°C.

Определение единицы измерения

Одна единица определяется как количество фермента, которое включает 25 нмоль dNTP в нерастворимый в кислоте материал за 30 минут при 65°C.

Контроль качества

1.Анализ чистоты белка (SDS-PAGE):Чистота ДНК-полимеразы Bst V2 составляет ≥99%, что определяется анализом SDS-PAGE с использованием обнаружения Coomassie Blue.

2.EндонуклеазаАктивность:Инкубация 50 мкл реакционной смеси, содержащей минимум 8 ед. ДНК-полимеразы Bst V2, с 1 мкг λДНК в течение 16 часов при 37 ℃ не приводит к заметному разложению, как было определено.

3.Экзонуклеазная активность:Инкубация 50 мкл реакционной смеси, содержащей минимум 8 ед. ДНК-полимеразы Bst V2, с 1 мкг ДНК гидролизата λ-Hind Ⅲ в течение 16 часов при 37 ℃ не приводит к заметному разложению, как было определено.

4.Никейская активность:Инкубация 50 мкл реакционной смеси, содержащей минимум 8 ед. ДНК-полимеразы V2 Bst, с 1 мкг ДНК pBR322 в течение 16 часов при 37°C не приводит к заметному разложению, как было установлено.

5.РНКазная активность:Инкубация 50 мкл реакционной смеси, содержащей минимум 8 ед. ДНК-полимеразы Bst V2, с 1,6 мкг РНК MS2 в течение 16 часов при 37°C, как установлено, не приводит к заметному разложению.

6.кишечная палочкаДНК:120 ед. ДНК-полимеразы V2 Bst проверяют на наличие геномной ДНК E. coli с использованием TaqMan qPCR с праймерами, специфичными для локуса 16S рРНК E. coli.Загрязнение геномной ДНК E. coli составляет менее 1 копии.

Реакция ЛАМПЫ

Примечания:

1) а.SYTOTM 16 Green (25×): В зависимости от экспериментальных потребностей в качестве заменителей можно использовать другие красители;

2) б.Смесь праймеров: получена путем смешивания 20 мкМ FIP, 20 мкМ BIP, 2,5 мкМ F3, 2,5 мкМ B3, 5 мкМ LF, 5 мкМ LB и других объемов.

Реакция и состояние

1 × буфер HC Bst V2, температура инкубации от 60°C до 65°C.

Тепловая инактивация

 80°С, 20 минут