Ферменты UDG/UNG
UDG (урацил-ДНК-гликозилаза) может катализировать гидролиз N-гликозидной связи между основанием урацила и сахарофосфатным остовом в оцДНК и дцДНК.Он может легко контролировать аэрозольное загрязнение и подходит для обычных систем молекулярной биологии, таких как ПЦР, qPCR, RT-qPCR и LAMP.
Технические характеристики
| Хост выражения | Рекомбинантный ген E. coli с геном урацил-ДНК-гликозилазы |
| Молекулярная масса | 24. 8кДа |
| Чистота | ≥95% (SDS-СТР.) |
| Тепловая инактивация | 95℃, 5~10 мин. |
| Определение единицы измерения | Одна единица (Е) определяется как количество фермента, необходимое для катализа гидролиза 1 мкг дцДНК, содержащей dU, за 30 минут при 25 ℃. |
Хранилище
Продукт следует хранить при температуре -25℃~-15°C в течение двух лет.
инструкции
1.Приготовление реакционной смеси для ПЦР по следующей системе
| Компоненты | Объем (мкл) | Конечная концентрация |
| 10×ПЦР-буфер (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 ммоль/LMgCl | 3 | 1,5 ммоль/л |
| дУТФ(10 ммоль/л) | 3 | 0,6 ммоль/л |
| дЦТФ/дГТФ/дАТФ/дТТФ (10 ммоль/выщелачивание) | 1 | 0,2 ммоль/выщелачивание |
| ДНК шаблона | X | - |
| Праймер1 (10 мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| Праймер 2 (10 мкмоль/л) | 2 | 0,4 мкмоль/л |
| ДНК-полимераза Taq (5 ЕД/мкл) | 0. 5 | 0,05 Ед/мкл |
| Урацил ДНК-гликозилаза (UDG/UNG), 1 ЕД/мкл | 1 | 1 Ед/мкл |
| ddH₂O | До 50 | - |
Примечание: В соответствии с экспериментальными требованиями конечную концентрацию dUTP можно регулировать в пределах 0,2–0,6 ммоль/л, а dTTP можно добавлять выборочно в концентрации 0,2 ммоль/л.
2.Процедура амплификации
| Шаг цикла | Температура | Время | Циклы |
| деградация шаблона, содержащего dU | 25℃ | 10 минут | 1 |
| Активация UDG, начальная денатурация матрицы | 95℃ | 5~10 минут | 1 |
| Денатурация | 95℃ | 10 секунд |
30-35 |
| Отжиг | 60℃ | 20 секунд | |
| Расширение | 72℃ | 30сек/кб | |
| Окончательное продление | 72℃ | 5 мин | 1 |
Примечание: Время реакции при 25°C можно регулировать в пределах 5-10 минут в соответствии с экспериментальными требованиями.
Примечания
1.UDG активен в большинстве буферов для реакций ПЦР.
2.При использовании ферменты следует хранить в холодильнике или на ледяной бане, а также хранить при температуре -20°C сразу после использования.
3.Пожалуйста, надевайте необходимые средства индивидуальной защиты, такие как лабораторный халат и перчатки, чтобы обеспечить свое здоровье и безопасность!
