Чувствительный к температуре УНГ
Температурно-чувствительный UNG (TS-UNG) получают путем рекомбинантной экспрессии в E. coli.Фермент катализирует высвобождение свободного урацила из урацилсодержащей одно- и двухцепочечной ДНК и неактивен в отношении РНК.По сравнению с обычным ферментом UNG генного происхождения E. coli, фермент TS-UNG обладает более высокой активностью при низких температурах (20 ℃ ~ 37 ℃), чувствителен к температуре и легко инактивируется (50 ℃), что позволяет избежать деградации dUTP-содержащей амплификации. продукты при комнатной температуре по остаточной активности, которая может остаться после инактивации обычного фермента УНГ.Таким образом, фермент TS-UNG не только подходит для реакции предотвращения загрязнения ПЦР, но также хорошо сочетается с программой амплификации RT-PCR и может использоваться в реакции предотвращения загрязнения RT-PCR.
Рекомендуемое применение
Усиление предотвращения загрязнения
Условия хранения
-20°C для длительного хранения, перед использованием следует тщательно перемешать, избегать частого замораживания-оттаивания.
Буфер хранения
20 мМ трис-HCl (pH 7,5), 100 мМ NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 1 мМ ДТТ, стабилизатор, 50% глицерин.
Определение единицы измерения
Количество фермента, необходимое для расщепления 1 мкг одноцепочечной ДНК, содержащей основания dU, за 1 час при 37°C, составляет 1 единицу активности (Е).
Контроль качества
1.Электрофоретическая чистота SDS-PAGE более 98%.
2.Активность разложения, контроль от партии к партии, стабильность
3.Никакой экзогенной нуклеазной активности, никакой экзогенной эндонуклеазы или загрязнения экзонуклеазой.
инструкции
| Компоненты | Объем (мкл) | Конечная концентрация |
| 10 × ПЦР-буфер (без dNTP, Mg²+бесплатно) | 5 | 1× |
| дУТФ (дЦТФ, дГТФ, дАТФ) | - | 200 мкм |
| dUTP (заменить dTTP) | - | 200-600 мкм |
| 25 мМ MgCl2 | 2–8 мкл | 1-4 мм |
| 5 ед./мкл Taq | 0,25 | 1,25 ЕД |
| 1 ЕД/мкЛТС-УНГ | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 ЕВ (0,1-0,5 ЕВ) |
| 25 × Праймер-микса | 2 | 1× |
| Шаблон | - | <1 мкг/реакция |
| ddH₂O | до 50 | - |
Примечание: a: Если используется qPCR/qRT-PCR, флуоресцентный зонд следует добавить в реакционную систему.Обычно конечная концентрация праймера 0,2 мкМ может дать хорошие результаты;когда эффективность реакции плохая, концентрацию праймера можно регулировать в диапазоне 0,2-1 мкМ.Обычно концентрация зонда оптимизируется в диапазоне 0,1-0,3 мкМ.Можно провести эксперименты с градиентом концентрации, чтобы найти наилучшую комбинацию праймера и зонда.
Примечания
1.Оптимальная температура реакции фермента TS-UNG относительно низкая, и ее можно оптимизировать в диапазоне 20 ℃ ~ 37 ℃, дозировку фермента и время реакции можно оптимизировать в диапазоне 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~. 10 минут;и фермент может быть инактивирован в процессе обратной транскрипции.
2.Он подходит для ПЦР и RT-PCR для предотвращения загрязнения.
3.Избегайте частого замораживания и оттаивания и не подвергайте большим колебаниям температуры.
4.Разные гены, подлежащие амплификации, имеют разную эффективность использования dUTP и чувствительность к ферменту UNG, поэтому, если использование системы UNG приводит к снижению чувствительности обнаружения, реакционную систему следует настроить и оптимизировать. Если вам нужна техническая поддержка, обращайтесь Наша компания.
