Рназа А
Рибонуклеаза А (РНКаза А) представляет собой одноцепочечный полипептид, содержащий 4 дисульфидные связи, с молекулярной массой около 13,7 кДа.РНКаза А представляет собой эндорибонуклеазу, которая специфически разрушает одноцепочечную РНК по остаткам C и U.В частности, при расщеплении распознается фосфодиэфирная связь, образованная 5'-рибозой нуклеотида и фосфатной группой на 3'-рибозе соседнего пиримидинового нуклеотида, так что 2,3'-циклические фосфаты гидролизуются до соответствующих 3'-рибозных нуклеотидов. 'нуклеозидфосфаты (например, pG-pG-pC-pA-pG расщепляется РНКазой А с образованием pG-pG-pCp и A-PG).РНКаза А наиболее активно расщепляет одноцепочечную РНК.Рекомендуемая рабочая концентрация 1–100 мкг/мл, совместимая с различными реакционными системами.Низкую концентрацию соли (0–100 мМ NaCl) можно использовать для разрезания одноцепочечной РНК, двухцепочечной РНК и цепей РНК, образующихся в результате гибридизации РНК-ДНК.Однако при высокой концентрации соли (≥0,3 М) РНКаза А специфически расщепляет только одноцепочечную РНК.
РНКаза А чаще всего используется для удаления РНК во время получения плазмидной ДНК или геномной ДНК. Активность ДНКазы в процессе приготовления может легко повлиять на реакцию.Для инактивации активности ДНКазы можно использовать традиционный метод кипячения на водяной бане.Этот продукт не содержит ДНКазы и протеазы и не требует термической обработки перед использованием.Кроме того, этот продукт также можно использовать в экспериментах по молекулярной биологии, таких как анализ защиты от РНКазы и анализ последовательности РНК.
Условия хранения
Продукт можно хранить при температуре -25～-15℃, действителен в течение 2 лет.
инструкции
Это один из распространенных методов приготовления раствора для хранения РНКазы А.Его также можно приготовитьдругие методы в соответствии с традиционными методами лабораторной или справочной литературы (например,непосредственно растворяясь в 10 мМ трис-HCl, pH 7,5 или растворе трис-NaCl)
1. Используйте 10 мМ ацетата натрия (рН 5,2) для приготовления раствора для хранения РНКазы А с концентрацией 10 мг/мл.
2. Нагревание при 100 ℃ в течение 15 мин.
3. Остудить до комнатной температуры, добавить 1/10 объема 1 М трис-HCl (рН 7,4), довести его рН до 7,4 (дляНапример, добавьте 500 мл раствора для хранения РНКазы 10 г/мл 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Расфасован при температуре -20 ℃ для хранения в замороженном состоянии, срок хранения которого может достигать 2 лет.
[Примечания]: При кипячении раствора РНКазы А в нейтральных условиях образуется осадок РНКазы;Кипятите его при более низком pH, и если выпадает осадок, то можно наблюдать его, что может быть вызвано наличием белковых примесей.Если после кипячения обнаружен осадок, примеси можно удалить высокоскоростным центрифугированием (13000 об/мин), а затем расфасовать для хранения в заморозке.
Информация о продукте
| Синонимы | рибонуклеаза I;панкреатическая рибонуклеаза;Рибонуклеаза 3'-пиримидноолигонуклеотидогидролаза;РНКаза А;Эндорибонульцеаза I |
| Номер КАС. | 9001-99-4 |
| Появление | Белый лиофилизированный порошок |
| Молекулярная масса | ~ 13,7 кДа (аминокислотная последовательность) |
| Значение Ph | 7,6 (диапазон активности 6-10) |
| Подходящая температура | 60 ℃ (диапазон активности 15-70 ℃) |
| Активирующий агент | Na2+.К+ |
| Ингибитор | Ингибитор РНКазы |
| Метод инактивации | Невозможно инактивировать нагреванием, рекомендуется использовать центрифужную колонку. |
| Источник | бычий |
| Растворимость | Растворим в воде (10 мг/мл) |
| Потери на сушке | ≤5,0% |
| Ферментативная активность | ≥60 единиц Кунитца/мг |
| Изоэлектрическая точка | 9,6 |
Примечания
Для вашей безопасности и здоровья при работе надевайте лабораторные халаты и одноразовые перчатки.
