One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Кат. номер: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix предназначен для количественного определения флуоресценции на основе красителя SYBR Green I.Используя ген-специфические праймеры, реакции обратной транскрипции и кПЦР выполняются в одной пробирке, что исключает необходимость повторного открытия крышки и пипетирования, что значительно повышает эффективность анализа и снижает риск загрязнения.Для образцов РНК в наборе используется термостойкая обратная транскриптаза для эффективного синтеза кДНК и ДНК-полимераза HotStart Taq для количественной амплификации.При оптимизированной буферной системе чувствительность набора может достигать 0,1 пг для целей с высокой экспрессией и до 1 пг для целей с умеренной экспрессией.Набор подходит для амплификации и количественного определения образцов ДНК.Он обеспечивает чувствительное обнаружение и количественную оценку нуклеиновых кислот из различных образцов растений и животных, клеток и микроорганизмов.
Компоненты
| No | Имя | Объем | Объем |
| 1 | Расширенный буфер | 250 мкл | 2×1,25 мл |
| 2 | Усовершенствованная ферментная смесь | 20 мкл | 200 мкл |
| 3 | РНКаза свободна H2O | 250 мкл | 2×1,25 мл |
Условия хранения
Этот продукт следует хранить при температуре -25~-15℃ в защищенном от света месте в течение 1 года.
инструкции
1. Конфигурация системы реагированияd
| Компоненты | Объем (мкл) | Объем (мкл) | Конечная концентрация |
| Расширенный буфер | 12,5 | 25 | 1× |
| Усовершенствованная ферментная смесь | 1 | 2 | - |
| Форвард Праймер (10 мкмоль/л)a | 0,5 | 1 | 0,2 мкмоль/л |
| Обратный праймер (10 мкмоль/л)a | 0,5 | 1 | 0,2 мкмоль/л |
| Тамплейт РНКb | X | X | - |
| РНКаза свободна H2Оc | до 25 | до 50 | - |
Примечания:
1) а.ТКонечная концентрация праймера составляла 0,2 мкмоль/л, которую также можно было регулировать в пределах от 0,1 до 1 мкмоль/л по мере необходимости.
2) б.Реагент чрезвычайно чувствителен: общая РНК находится в диапазоне 1 пг-1 мкг, а тестирование образцов человека показало оптимальное введение в диапазоне 1 пг-100 нг, при этом общее значение Ct находится в диапазоне 15-30, в зависимости от ситуации.
3) в.Рекомендуется использовать 20 мкл или 50 мкл, чтобы обеспечить достоверность и воспроизводимость амплификации целевого гена.
4) д.Пожалуйста, готовьтесь на ультрачистом столе и используйте наконечники и реакционные пробирки, не содержащие остатков нуклеазы;рекомендуется использовать насадки с фильтрующими картриджами.Избегайте перекрестного загрязнения и аэрозольного загрязнения.
2.Программа реагирования
| Шаг цикла | Темп. | Время | Циклы |
| Обратная транскрипция | 50℃a | 6 минут | 1 |
| Начальная денатурация | 95℃ | 5 минут | 1 |
| Реакция амплификации | 95℃ | 15 секунд | 40 |
| 60℃b | 30 секунд | ||
| Стадия кривой плавления | Настройки инструмента по умолчанию | 1 | |
Примечания:
1) а.Температура обратной транскрипции может быть выбрана в диапазоне 50-55°C в соответствии с экспериментальными потребностями.Для образцов ДНК процесс обратной транскрипции можно опустить.
2) б.В особых случаях температуру отжига/растяжения можно регулировать в соответствии со значением Tm праймера, рекомендуется 60°C.
Примечания
1. Этот продукт предназначен только для исследовательского использования.
2. В целях вашей безопасности работайте в лабораторных халатах и одноразовых перчатках.
