Ингибитор РНКазы
Ингибитор мышиной РНКазы представляет собой рекомбинантный ингибитор мышиной РНКазы, экспрессированный и очищенный из E.coli.Он связывается с РНКазой A, B или C в соотношении 1:1 посредством нековалентной связи, тем самым ингибируя активность трех ферментов и защищая РНК от деградации.Однако он не эффективен против РНКазы 1, РНКазы Т1, нуклеазы S1, РНКазы H или РНКазы Aspergillus.Ингибитор мышиной РНКазы был протестирован с помощью RT-PCR, RT-qPCR и IVT мРНК и был совместим с различными коммерческими обратными транскриптазами, ДНК-полимеразами и РНК-полимеразами.
По сравнению с ингибиторами РНКазы человека, ингибитор РНКазы мыши не содержит двух цистеинов, которые очень чувствительны к окислению, что приводит к инактивации ингибитора.Это делает его стабильным при низких концентрациях ДТТ (менее 1 мМ).Эта особенность делает его подходящим для использования в реакциях, где высокие концентрации DTT неблагоприятны для реакции (например, ОТ-ПЦР в реальном времени).
Aзаявление
Этот продукт можно широко использовать в любых экспериментах, где возможно вмешательство РНКазы во избежание деградации РНК, например:
1.Синтез первой цепи кДНК, RT-PCR, RT-qPCR и т. д.
2.Защищает РНК от деградации во время транскрипции/трансляции in vitro (например, в системе репликации вируса in vitro).
3.Ингибирование активности РНКазы при разделении и очистке РНК.
Условия хранения
Продукт можно хранить при температуре -25～- 15 ℃, действителен в течение 2 лет.
Буфер хранения
50 мм KCl, 20 мм HEPES-KOH (pH 7,6, 25 ℃), 8 мм DTT и 50% глицерин.
Определение единицы измерения
Количество мышиного ингибитора РНКазы, необходимое для ингибирования активности 5 нг рибонуклеазы А на 50%, определяли как одну единицу (Е).
Молекулярный вес белка
Молекулярная масса ингибитора мышиной РНКазы составляет 50 кДа.
Контроль качества
Экзонуклеаза Активность:
40 ЕД мышиного ингибитора РНКазы с 1 мкг ДНК, переваренной λ-Hind III, при 37°C в течение 16 часов не приводят к разложению, что определяется электрофорезом в агарозном геле.
Эндонуклеазная активность:
40 ЕД мышиного ингибитора РНКазы с 1 мкг λ-ДНК при 37 ℃ в течение 16 часов не приводят к разложению, что определяется электрофорезом в агарозном геле.
Никинг Активность:
40 ЕД мышиного ингибитора РНКазы с 1 мкг pBR322 при 37 ℃ в течение 16 часов не приводят к разложению, что определяется электрофорезом в агарозном геле.
РНКаза Активность:
40 ЕД мышиного ингибитора РНКазы с 1,6 мкг РНК MS2 в течение 4 часов при 37 ℃ не приводят к разложению, что определяется электрофорезом в агарозном геле.
E.ДНК кишечной палочки:
40 ед. ингибитора РНКазы мыши проверяют на наличие геномной ДНК E. coli с помощью TaqMan qPCR с праймерами, специфичными для локуса 16S рРНК E. coli.Контаминация геномной ДНК E. coli составляет ≤ 0,1 пг/40 ед.
Nотметитьs
1. Резкое колебание или перемешивание приведет к инактивации фермента.
2. Оптимальный температурный диапазон этого ингибитора составлял 25-55 ℃, и он инактивировался при 65 ℃ и выше.
3. Активность РНКазы H, РНКазы 1 и РНКазы Т1 не ингибировалась мышиным ингибитором РНКазы.
4. Ингибирование активности РНКазы обнаружено в широком диапазоне рН (все рН 5-9 были активны), а наибольшая активность наблюдалась при рН 7-8.
5. Поскольку рибонуклеазы обычно сохраняют активность в денатурирующих условиях, необходимо соблюдать осторожность, чтобы избежать денатурации молекул ингибитора РНКазы, которые образовали комплекс с рибонуклеазой.Чтобы предотвратить высвобождение активной рибонуклеазы, следует избегать температур выше 50 °C и высоких концентраций мочевины или других денатурирующих агентов.
