Премикс мультиплексного зонда для кПЦР
Кат. номер: HCB5051A
TaqMan Multiplex qPCR Master Mix (на основе красителей) представляет собой предварительное решение для 2 × количественной ПЦР-амплификации в реальном времени, характеризующееся высокой чувствительностью и специфичностью, имеющее синий цвет и имеющее эффект добавления образца.Этот продукт представляет собой предварительно смешанный реагент 2× Mix, который позволяет проводить до четырех флуоресцентных количественных реакций ПЦР в одной реакционной лунке.Этот продукт содержит метод генетически модифицированных антител для горячего запуска фермента Taq, что значительно повышает чувствительность и специфичность амплификации.В то же время этот продукт глубоко оптимизировал мультиреакционный буфер, который может повысить эффективность амплификации реакции и способствовать эффективной амплификации шаблонов с низкой концентрацией.Этот продукт можно использовать для генотипирования и мультиплексного количественного анализа.
Спецификация
| Горячий старт | Встроенный горячий старт. |
| Метод обнаружения | Обнаружение праймер-зонда |
| ПЦР-метод | кПЦР |
| Полимераза | ДНК-полимераза Taq |
| Тип образца | ДНК |
Условия хранения
Продукт поставляется с сухим льдом и может храниться при температуре -25~-15℃ в течение 2 лет.
инструкции
1. РеакцияСистема
| Компоненты | Объем (мкл) | Окончательная концентрация |
| 2× TaqMan мультиплексная кПЦР Master Mix | 12,5 | 1× |
| Смесь праймеров (10 мкмоль/л) a | × | 0,1–0,5 мкмоль/л |
| Зондовая смесь (10 мкмоль/л)b | × | 50–250 нмоль/л |
| Эталонный краситель Rox | 0,5 | 1× |
| ДНК-матрица/кДНК | 1-10 | - |
| ддх2O | до 25 | - |
Примечания:Перед применением тщательно перемешайте, чтобы избежать образования пузырьков при энергичном встряхивании.
а.Концентрация праймеров: Primer Mix содержит несколько пар праймеров, обычно каждый праймер имеет конечную концентрацию 0,2 мкмоль/л, а также может быть отрегулирован в пределах от 0,1 до 0,5 мкмоль/л по мере необходимости.
б.Концентрация зонда: Probe Mix содержит несколько зондов с разными сигналами флуоресценции, и концентрацию каждого зонда можно регулировать в пределах от 50 до 250 нмоль/л в зависимости от конкретной ситуации.
1.Эталон красителя Rox: он используется в приборах для амплификации ПЦР в реальном времени, таких как Applied Biosystems, для исправления ошибки сигнала флуоресценции, генерируемого между лунками;этот продукт не содержит эталонного красителя Rox.При необходимости рекомендуется использовать Cas#10200.
2.Разбавление матрицы: qPCR очень чувствителен, поэтому перед использованием рекомендуется разбавлять матрицу.Если матрица представляет собой исходный раствор кДНК, объем матрицы не должен превышать 1/10 общего объема.
3.Реакционная система: рекомендуется использовать 25 мкл, 30 мкл или 50 мкл для обеспечения эффективности и повторяемости амплификации целевого гена.
4.Подготовка системы: подготовьтесь на сверхчистом столе и используйте наконечники и реакционные пробирки без остатков нуклеазы;рекомендуется использовать насадки с фильтрующими картриджами.Избегайте перекрестного загрязнения и аэрозольного загрязнения.
2.Программа реагирования
| Шаг цикла | Температура. | Время | Циклы |
| Начальная денатурация | 95 ℃ | 5 минут | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 15 секунд | 45 |
| Отжиг/Расширение | 60 ℃ | 30 секунд |
Примечания:
1.Отжиг/Расширение: Температуру и время можно соответствующим образом отрегулировать в соответствии с заданным значением Tm праймера.
2.Получение сигнала флуоресценции: время получения сигнала флуоресценции, необходимое для разных инструментов обнаружения qPCR, различно, пожалуйста, установите в соответствии с минимальным ограничением времени.Время некоторых распространенных инструментов устанавливается следующим образом:
20 секунд: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 секунда: Прикладные биосистемы 7300
32 сек: Прикладные Биосистемы 7500
Примечания
Пожалуйста, надевайте необходимые средства индивидуальной защиты, такие как лабораторный халат и перчатки, чтобы обеспечить свое здоровье и безопасность!
