Набор для генотипирования мышей

Кат. номер: HCR2021A

Этот продукт представляет собой набор, предназначенный для быстрой идентификации генотипов мышей, включая неочищенную экстракцию ДНК и систему ПЦР-амплификации.Продукт можно использовать для ПЦР-амплификации непосредственно из хвоста, уха, пальца ноги и других тканей мыши после простого расщепления лизисным буфером и протеиназой k.Никакого ночного расщепления, фенол-хлороформной экстракции или очистки на колонке, что просто и сокращает время экспериментов.Продукт подходит для амплификации целевых фрагментов размером до 2 КБ и мультиплексных ПЦР-реакций с использованием до 3 пар праймеров.Смесь для прямой ПЦР с 2×мышиными тканями содержит генно-инженерную ДНК-полимеразу, Mg.²⁺, dNTP и оптимизированную буферную систему для обеспечения высокой эффективности амплификации и устойчивости к ингибиторам, так что реакции ПЦР можно проводить путем добавления матрицы и праймеров и регидратации продукта до 1×.Продукт ПЦР, амплифицированный с помощью этого продукта, имеет заметное основание «А» на 3'-конце и может быть использован непосредственно для клонирования ТА после очистки.

Компоненты

Условия хранения

Продукты следует хранить при температуре -25~-15℃ в течение 2 лет.После оттаивания Lysis Buffer можно хранить при температуре 2–8 ℃ для кратковременного многократного использования и хорошо перемешивать при использовании.

Приложение

Этот продукт подходит для анализа нокаута мышей, обнаружения трансгенов, генотипирования и так далее.

Функции

1.Простое управление: нет необходимости извлекать геномную ДНК;

2.Широкое применение: подходит для прямой амплификации различных тканей мыши.

инструкции

1.Выпуск геномной ДНК

1) Приготовление лизата

Лизат тканей готовят в соответствии с количеством образцов мышей, подлежащих лизису (лизат тканей следует готовить на месте в соответствии с дозировкой и тщательно перемешивать для использования), а пропорция реагентов, необходимая для одного образца, следующая:

2) Подготовка проб и лизис

Рекомендуемое использование ткани

Возьмите необходимое количество образцов тканей мыши в чистые центрифужные пробирки, добавьте 200 мкл свежего лизата ткани в каждую центрифужную пробирку, перемешайте и встряхните, затем инкубируйте при 55 ℃ в течение 30 минут, а затем нагревайте при 98 ℃ в течение 3 минут.

3) Центрифугирование

Хорошо встряхните лизат и центрифугируйте при 12 000 об/мин в течение 5 минут.Супернатант можно использовать в качестве матрицы для ПЦР-амплификации.Если шаблон необходим для хранения, перенесите надосадочную жидкость в другую стерильную центрифужную пробирку и храните при -20 ℃ в течение 2 недель.

2.ПЦР-амплификация

Достаньте смесь 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix из -20 ℃ и разморозьте на льду, перемешайте и подготовьте реакционную систему для ПЦР в соответствии со следующей таблицей (работайте на льду):

Примечание:

а) Добавляемое количество не должно превышать 1/10 от количества системы, а если добавить слишком много, ПЦР-амплификация может быть ингибирована.

Рекомендуемые условия ПЦР

Примечание:

а) Температура отжига: в зависимости от значения Tm праймера рекомендуется устанавливать температуру отжига на меньшее значение Tm праймера +3~5℃.

Распространенные проблемы и решения

1.Никаких целевых полосок

1) Избыточный продукт лизиса.Выберите наиболее подходящее количество шаблона, обычно не более 1/10 системы;

2) Слишком большой размер выборки.Разбавьте лизат в 10 раз, а затем амплифицируйте или уменьшите размер образца и повторите анализ;

3) Образцы тканей несвежие.Рекомендуется использовать свежие образцы тканей;

4) Плохое качество грунтовки.Используйте геномную ДНК для амплификации, чтобы проверить качество праймера и оптимизировать его конструкцию.

2.Неспецифическая амплификация

1) Температура отжига слишком низкая, а количество циклов слишком велико.Увеличить температуру отжига и уменьшить количество циклов;

2) Концентрация шаблона слишком высока.Уменьшите количество шаблона или разбавьте шаблон в 10 раз после амплификации;

3) Плохая специфичность праймера.Оптимизируйте конструкцию праймера.

Примечания

1.Чтобы избежать перекрестного загрязнения между образцами, следует подготовить несколько инструментов для отбора проб, а поверхность инструментов можно очистить 2% раствором гипохлорита натрия или очистителем нуклеиновых кислот после каждого отбора проб, если требуется повторное использование.

2.Рекомендуется использовать свежие ткани мыши, а объем выборки не должен быть слишком большим, чтобы не повлиять на результаты амплификации.

3.Лизисный буфер следует избегать частого замораживания и оттаивания, его можно хранить при температуре 2–8 ℃ для кратковременного многократного использования.При хранении при низкой температуре может выпадать осадок, и его необходимо полностью растворить перед использованием.

4.Смесь для ПЦР следует избегать частого замораживания и оттаивания, ее можно хранить при температуре 4 ℃ для кратковременного повторного использования.

5.Этот продукт предназначен только для научных экспериментальных исследований и не должен использоваться для клинической диагностики или лечения.