BspQI
BspQI может быть рекомбинантно экспрессирован в E. coli, которая распознает определенные сайты и продуцируется под действием
BspQI, эндонуклеаза рестрикции IIs, получена из рекомбинантного штамма E. coli, который несет клонированный и модифицированный ген BspQI из Bacillus sphaericus.Он может распознавать определенные сайты, а последовательность узнавания и сайты расщепления следующие:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Особенности продукта
1. Высокая активность, Быстрое пищеварение;
2. Низкая звездчатая активность, обеспечивающая точную резку типа «скальпель»;
3. Без BSA и животного происхождения;
Чувствительность к метилированию
Dя метилирование:Не чувствительный;
Dсм-метилирование:Не чувствительный;
CpG-метилирование:Не чувствительный;
Условия хранения
Продукт должен быть отправлен при температуре ≤ 0 ℃;Хранить при температуре -25~-15℃.
Буфер хранения
20 мМ Трис-HCl, 0,1 мМ ЭДТА, 500 мМ KCl, 1,0 мМ дитиотреитола, 500 мкг/мл рекомбинантного альбумина, 0,1 % тритиона X-100 и 50 % глицерина (pH 7,0 при 25°C).
Определение единицы измерения
Одна единица определяется как количество фермента, необходимое для переваривания 1 мкг ДНК внутреннего контроля за 1 час при 50°C в общем объеме реакции 50 мкл.
Контроль качества
Анализ чистоты белка (SDS-PAGE):Чистота BspQI составляла ≥95%, что определялось анализом SDS-PAGE.
РНКаза:10 ед. BspQI с 1,6 мкг РНК MS2 в течение 4 часов при 50 ℃ не приводят к разложению, что определяется электрофорезом в агарозном геле.
Неспецифическая ДНКазная активность:10 ед. BspQI с 1 мкг λ-ДНК при 50 ℃ в течение 16 часов по сравнению с 50 ℃ в течение 1 часа не дают избытка ДНК, что определяется электрофорезом в агарозном геле.
Лигирование и повторная резка:После расщепления 1 мкг λДНК 10 ед. BspQI фрагменты ДНК можно лигировать ДНК-лигазой Т4 при 16°C.И эти лигированные фрагменты можно перерезать с помощью BspQI.
кишечная палочка ДНК: Обнаружение qPCR TaqMan, специфичной для 16s рДНК E. coli, показало, что остаток генома E.coli ≤ 0,1 пг/мкл.
Остаток белка-хозяина:≤ 50 частей на миллион
Бактериальный Эндотоксин: LAL-тест, согласно Китайской Фармакопее IV, издание 2020 г., метод определения предела геля, общие правила (1143).Содержание бактериального эндотоксина должно быть ≤10 ЕЭ/мг.
Реакционная система и условия
| Компонент | Объем |
| BspQ I(10 ед/мкл) | 1 мкл |
| ДНК | 1 мкг |
| 10 буферов BspQ I | 5 мкл |
| дд H2O | До 50 мкл |
Условия реакции: 50 ℃, 1~ 16 ч.
Тепловая инактивация: 80°C в течение 20 мин.
Рекомендуемая реакционная система и условия могут обеспечить относительно хороший эффект переваривания ферментов, это только для справки, подробности см. в результатах эксперимента.
Применение продукта
Рестрикционное эндонуклеазное расщепление, быстрое клонирование.
Примечания
1. Объем фермента ≤ 1/10 объема реакции.
2. Звездная активность может возникнуть при концентрации глицерина более 5%.
3. Активность расщепления может возникнуть, если соотношение субстрата ниже рекомендуемого.
