Щелочная фосфатаза (ALP)

Щелочная фосфатаза получена из рекомбинантного штамма E. coli, несущего ген TAB5.Фермент катализирует дефосфорилирование 5'- и 3'-концов фосфомоноэфиров ДНК и РНК.Кроме того, он гидролизует рибозу, а также дезоксирибонуклеозидтрифосфаты (NTP и dNTP).Щелочная фосфатаза TAB5 действует на 5' выступающие, 5' утопленные и тупые концы.Фосфатазу можно использовать во многих приложениях молекулярной биологии, таких как клонирование или мечение концов зондов для удаления фосфорилированных концов ДНК или РНК.В экспериментах по клонированию дефосфорилирование предотвращает самолигирование линеаризованной плазмидной ДНК.Он также может расщеплять невключенные dNTP в реакциях ПЦР, чтобы подготовить матрицу для секвенирования ДНК.Фермент полностью и необратимо инактивируется при нагревании при 70°C в течение 5 минут, что делает ненужным удаление фосфатазы перед лигированием или мечением концов.