Набор для экстракции вирусной ДНК/РНК
Этот набор подходит для быстрого извлечения вирусной ДНК/РНК высокой чистоты из таких образцов, как мазки из носоглотки, мазки из окружающей среды, супернатанты клеточных культур и супернатанты гомогената тканей.В основе набора лежит технология очистки кремнеземной мембраны, которая устраняет необходимость использования органических растворителей фенола/хлороформа или трудоемкого осаждения спиртом для извлечения вирусной ДНК/РНК высокого качества.Полученные нуклеиновые кислоты не содержат примесей и готовы к использованию в последующих экспериментах, таких как обратная транскрипция, ПЦР, ОТ-ПЦР, ПЦР в реальном времени, секвенирование нового поколения (NGS) и нозерн-блоттинг.
Условия хранения
Хранить при температуре 15–25 ℃ и транспортировать при комнатной температуре.
Компоненты
| Компоненты | 100RXNS |
| Буфер ВЛ | 50 мл |
| Буфер RW | 120 мл |
| DDH2 O без РНКазы | 6 мл |
| Колонки FastPure РНК | 100 |
| Пробирки для сбора (2 мл) | 100 |
| Пробирки для сбора проб без РНКазы (1,5 мл) | 100 |
Буфер ВЛ:Обеспечьте среду для лизиса и связывания.
Буфер RW:Удалите остатки белков и другие примеси.
DDH2O без РНКазы:Элюируйте ДНК/РНК с мембраны в спин-колонке.
Колонки FastPure РНК:Специфически адсорбируют ДНК/РНК.
Пробирки для сбора 2 мл:Соберите фильтрат.
Пробирки для сбора проб без РНКазы 1,5 мл:Соберите ДНК/РНК.
Приложения
Мазки из носоглотки, мазки из окружающей среды, супернатанты клеточных культур и супернатанты гомогенатов тканей.
Самостоятельно подготовленный Материалы
Наконечники для пипеток без РНКазы, центрифужные пробирки без РНКазы объемом 1,5 мл, центрифуга, вихревой смеситель и пипетки.
Процесс эксперимента
Выполните все следующие шаги в шкафу биобезопасности.
1. Добавьте 200 мкл образца в центрифужную пробирку без РНКазы (дополните PBS или 0,9% NaCl в случае недостаточного количества образца), добавьте 500 мкл буфера VL, хорошо перемешайте встряхиванием в течение 15–30 секунд и центрифугируйте. ненадолго, чтобы собрать смесь на дне пробирки.
2. Поместите колонки FastPure RNA в пробирки для сбора проб объемом 2 мл.Перенесите смесь из шага 1 в колонки FastPure RNA, центрифугируйте при 12 000 об/мин (13 400 × g) в течение 1 мин и выбросьте фильтрат.
3. Добавьте 600 мкл буфера RW в колонки FastPure RNA, центрифугируйте при 12 000 об/мин (13 400 × g) в течение 30 секунд и выбросьте фильтрат.
4. Повторите шаг 3.
5. Центрифугируйте пустую колонку при 12 000 об/мин (13 400 × g) в течение 2 минут.
6. Осторожно перенесите колонки FastPure RNA в новые пробирки для сбора проб без РНКазы объемом 1,5 мл (входят в комплект) и добавьте 30–50 мкл ddH2O без РНКазы в центр мембраны, не касаясь колонки.Дайте постоять при комнатной температуре в течение 1 минуты и центрифугируйте при 12 000 об/мин (13 400 × g) в течение 1 минуты.
7. Выбросьте колонки FastPure RNA.ДНК/РНК можно использовать непосредственно для последующих анализов или хранить при температуре от -30 до -15°C в течение короткого периода времени или от -85 до -65°C в течение более длительного периода.
Примечания
Только для исследовательского использования.Не для использования в диагностических процедурах.
1. Заранее доведите образцы до комнатной температуры.
2. Вирусы очень заразны.Перед экспериментом убедитесь, что приняты все необходимые меры безопасности.
3. Избегайте повторного замораживания и оттаивания образца, так как это может привести к деградации или снижению выхода выделенной вирусной ДНК/РНК.
4. Самостоятельно приготовленное оборудование включает в себя наконечники для пипеток, не содержащие РНКазы, центрифужные пробирки без РНКазы объемом 1,5 мл, центрифугу, вихревой смеситель и пипетки.
5. При использовании набора надевайте лабораторный халат, одноразовые латексные перчатки и одноразовую маску и используйте расходные материалы, не содержащие РНКазы, чтобы свести к минимуму риск загрязнения РНКазой.
6. Выполняйте все действия при комнатной температуре, если не указано иное.
Механизм и рабочий процесс
