Ультрануклеаза
Ультрануклеаза представляет собой генетически модифицированную эндонуклеазу, полученную из Serratia marcescens, которая способна расщеплять ДНК или РНК, как двухцепочечные, так и одноцепочечные, линейные или кольцевые, в широком диапазоне условий, полностью расщеплять нуклеиновые кислоты до 5'-монофосфатных олигонуклеотидов с длиной 3-5 оснований. .После генно-инженерной модификации продукт был ферментирован, экспрессирован и очищен в Escherichia coli (E. coli), что снижает вязкость клеточного супернатанта и клеточного лизата в научных исследованиях, а также повышает эффективность очистки и функциональные исследования белка.Его также можно использовать в генной терапии, очистке вирусов, производстве вакцин, фармацевтической промышленности белков и полисахаридов в качестве реагента для удаления остатков нуклеиновой кислоты хозяина.
Особенности продукта
| Номер КАС. | 9025-65-4 |
| Номер ЕС. | |
| Молекулярная масса | 30кДа |
| Изоэлектрическая точка | 6,85 |
| Чистота белка | ≥99% (SDS-PAGE и SEC-HPLC) |
| Конкретная деятельность | ≥1.1×106 ЕД/мг |
| Оптимальная температура | 37°С |
| Оптимальный pH | 8.0 |
| Протеазная активность | отрицательный |
| Бионагрузка | <10 КОЕ/100 000 Ед |
| Остаточный белок клетки-хозяина | ≤10 частей на миллион |
| Тяжелый металл | ≤10 частей на миллион |
| Бактериальный эндотоксин | <0,25 евро/1000 ед. |
| Буфер хранения | 20 мМ трис-HCl, pH 8,0, 2 мМ MgCl2, 20 мМ NaCl, 50% глицерин |
Условия хранения
Транспортировка: ≤0°C; -25~-15°C. Хранение. Срок действия: 2 года (избегать замораживания-оттаивания).
Определение единицы измерения
Количество фермента, используемого для изменения значения поглощения △A260 на 1,0 в течение 30 минут при 37°C, pH 8,0, что эквивалентно переваренной 37 мкг ДНК спермы лосося путем разрезания на олигонуклеотиды, определяли как активную единицу (Е).
Контроль качества
Остаточный белок клетки-хозяина: набор ИФА
•Протеаза Остатки: Ультрануклеаза 250 КУ/мл реагировала с субстратом в течение 60 минут, активности не обнаружено.
•Бактериальный эндотоксин: LAL-Test, Метод испытания предела геля Фармакопеи Китайской Народной Республики, том 4 (издание 2020 г.).Общие правила (1143).
•Бионагрузка: Фармакопея Китайской Народной Республики, том 4 (издание 2020 г.) — Общие сведения
Правила проведения испытаний на стерильность (1101), Национальный стандарт КНР, GB 4789.2-2016.
•Тяжелый металл:ИСП-АЕС, HJ776-2015.
Операция
Активность ультрануклеазы значительно ингибировалась, когда концентрация SDS превышала 0,1% или ЭДТА.
концентрация превышала 1 мМ. Поверхностно-активные вещества Тритон Х-100, Твин 20 и Твин 80 не влияли на нуклеазу.
свойства, когда концентрация была ниже 1,5%.
| Операция | Оптимальная работа | Действительная операция |
| Температура | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0- 11,0 |
| Мг2+ | 1-2 мм | 1- 15 мм |
| DTT | 0- 100 мм | >100 мм |
| 2-меркаптоэтанол | 0- 100 мм | >100 мм |
| Ион одновалентного металла （Na+, K+ и т.д.） | 0-20 мм | 0-200 мм |
| РО43- | 0- 10 мм | 0- 100 мм |
Использование и дозировка
• Удалить экзогенную нуклеиновую кислоту из вакцинных продуктов, снизить риск остаточной токсичности нуклеиновых кислот и повысить безопасность продукции.
• Уменьшите вязкость кормовой жидкости, вызванную нуклеиновой кислотой, сократите время обработки и увеличьте выход белка.
• Удалить нуклеиновую кислоту, обернувшую частицу (вирус, тело включения и т. д.), что способствует
к высвобождению и очистке частиц.
| Экспериментальный тип | Производство белка | Вирус, Вакцина | Клеточные препараты |
| Количество ячеек | 1 г влажного веса клеток (ресуспендировали в 10 мл буфера) | 1л брожения жидкий супернатант | 1л культуры |
| Минимальная дозировка | 250У | 100U | 100U |
| Рекомендуемая дозировка | 2500у.е. | 25000у.е. | 5000у.е. |
• Обработка нуклеазой может улучшить разрешение и степень извлечения образца для колоночной хроматографии, электрофореза и блоттинг-анализа.
• При генной терапии нуклеиновую кислоту удаляют для получения очищенных аденоассоциированных вирусов.
