Премикс зонда для быстрой RT-qPCR One Step-UNG
Кат. номер: HCR5143A
Набор зондов One Step RT-qPCR (FOR FAST) — это набор для быстрого обнаружения RT-qPCR на основе зондов, подходящий для одноплексной или мультиплексной количественной ПЦР с использованием РНК в качестве матрицы (например, РНК-вируса).В этом продукте используется новое поколение модифицированной антителами ДНК-полимеразы Taq и специализированной одноэтапной обратной транскриптазы с оптимизированным буфером для быстрой амплификации, который имеет более высокую скорость амплификации, более высокую эффективность и специфичность амплификации.Он поддерживает сбалансированную амплификацию как одиночных, так и мультиплексных образцов с низкой и высокой концентрацией за короткое время.
Компоненты
1. 5×RT-qPCR буфер (U+)
2. Ферментная смесь (У+)
Примечания:
а.Буфер 5×RT-qPCR (U+) включает dNTP и Mg2+;
б.Смесь ферментов (U+) включает обратную транскриптазу, ДНК-полимеразу Hot Start Taq, ингибитор РНКазы и UDG;
в.Используйте наконечники, не содержащие РНКазы, EP-пробирки и т. д.
Перед использованием тщательно перемешайте буфер 5×RT-qPCR (U+).Если после оттаивания выпадает осадок, подождите, пока буфер вернется к комнатной температуре, перемешайте и растворите его, а затем используйте его как обычно.
Условия хранения
Продукт поставляется с сухим льдом и может храниться при температуре -25~-15℃ в течение 1 года.
инструкции
1. Реакция Система
| Компоненты | Объем (20 мкл реакция) |
| 2 × буфер RT-qPCR | 4 мкл |
| Ферментная смесь (U+) | 0,8 мкл |
| Праймер Форвард | 0,1 ~ 1,0 мкм |
| Праймер Реверс | 0,1 ~ 1,0 мкм |
| Такман Зонд | 0,05~0,25 мкм |
| Шаблон | Х мкл |
| Вода без РНКазы | до 25 мкл |
Примечания: Объем реакции составляет 10–50 мкл.
2. Протокол езды на велосипеде (Sстандарт)
| Цикл шаг | Темп. | Время | Циклы |
| Обратная транскрипция | 55 ℃ | 10 минут | 1 |
| Начальная денатурация | 95 ℃ | 30 секунд | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 10 секунд | 45 |
| Отжиг/Расширение | 60 ℃ | 30 секунд |
| Велосипедный протокол (Быстрый) Цикл шаг |
Темп. |
Время |
Циклы |
| Обратная транскрипция | 55 ℃ | 5 мин | 1 |
| Начальная денатурация | 95 ℃ | 5 с | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 3 с | 43 |
| Отжиг/Расширение | 60 ℃ | 10 с |
Примечания:
а.Температура обратной транскрипции составляет от 50 ℃ до 60 ℃, повышение температуры помогает амплифицировать сложные структуры и шаблоны с высоким содержанием CG;
б.Оптимальную температуру отжига необходимо регулировать на основе значения Tm праймера и выбирать самое короткое время для сбора сигнала флуоресценции на основе прибора ПЦР в реальном времени.
Примечания
Пожалуйста, надевайте необходимые средства индивидуальной защиты, такие как лабораторный халат и перчатки, чтобы обеспечить свое здоровье и безопасность!
