ДНКаза I
ДНКаза I (дезоксирибонуклеаза I) представляет собой эндодезоксирибонуклеазу, которая может расщеплять одно- или двухцепочечную ДНК.Он распознает и расщепляет фосфодиэфирные связи с образованием монодезоксинуклеотидов или одно- или двухцепочечных олигодезоксинуклеотидов с фосфатными группами на 5'-конце и гидроксилом на 3'-конце.Активность ДНКазы I зависит от Ca2+ и может активироваться ионами двухвалентных металлов, таких как Mn2+ и Zn2+.5 мМ Ca2+ защищает фермент от гидролиза.В присутствии Mg2+ фермент мог случайным образом распознавать и расщеплять любой участок любой цепи ДНК.В присутствии Mn2+ двойные цепи ДНК могут быть одновременно распознаны и расщеплены почти в одном и том же сайте с образованием фрагментов ДНК с плоскими концами или фрагментов ДНК с липкими концами с выступающими 1-2 нуклеотидами.
Свойство продукта
ДНКазу I бычьей поджелудочной железы экспрессировали в дрожжевой системе экспрессии и очищали.
Cкомпоненты
| Компонент | Объем | |||
| 0,1КУ | 1КУ | 5КУ | 50КУ | |
| ДНКаза I, без РНКазы | 20 мкл | 200 мкл | 1мл | 10мл |
| 10 × буфер ДНКазы I | 1мл | 1мл | 5× 1мл | 5 × 10 мл |
Транспортировка и хранение
1. Стабильность при хранении: – 15℃~-25℃ при хранении;
2.Устойчивость при транспортировке: Транспортировка под паковым льдом;
3. Поставляется в виде: 10 мМ трис-HCl, 2 мМ CaCl.2, 50% глицерин, pH 7,6 при 25℃.
Определение единицы измерения
Одна единица определяется как количество фермента, которое полностью разрушит 1 мкг ДНК pBR322 за 10 минут при 37°C.
Контроль качества
РНКаза:5 ед. ДНКазы I с 1,6 мкг РНК MS2 в течение 4 часов при 37 ℃ не приводят к деградации, что определяется электрофорезом в агарозном геле.
Бактериальный Эндотоксин:LAL-тест, согласно Китайской Фармакопее IV, издание 2020 г., метод определения предела геля, общие правила (1143).Содержание бактериального эндотоксина должно быть ≤10 ЕЭ/мг.
Инструкции по использованию
1. Приготовьте реакционный раствор в пробирке без РНКазы в соответствии с указанными ниже пропорциями:
| Компонент | Объем |
| РНК | Х мкг |
| 10 × буфер ДНКазы I | 1 мкл |
| ДНКаза I, без РНКазы (5 ед./мкл) | 1 ЕД на мкг РНК |
| ддх2O | До 10 мкл |
2,37 ℃ в течение 15 минут;
3. Добавьте буфер терминации, чтобы остановить реакцию, и нагревайте при 65 ℃ в течение 10 минут, чтобы инактивировать ДНКазу I. Образец можно непосредственно использовать для следующего эксперимента по транскрипции.
Примечания
1. Используйте 1 ед. ДНКазы I на мкг РНК или 1 ед. ДНКазы I для менее 1 мкг РНК.
2. ЭДТА следует добавлять до конечной концентрации 5 мМ, чтобы защитить РНК от разрушения во время инактивации фермента.
