Набор CHO HCP ELISA
В этом анализе используется одноэтапный иммуносорбентный метод ELISA.Образцы, содержащие CHOK1 HCP, одновременно реагируют с меченными HRP козьими антителами против CHOK1 и антителами против CHOK1, нанесенными на планшет ELISA, в конечном итоге образуя сэндвич-комплекс твердофазное антитело-меченное HCP антитело.Несвязавшийся антиген-антитело можно удалить путем промывания планшета для ИФА.Субстрат ТМВ добавляют в лунку для обеспечения достаточной реакции.Развитие окраски останавливают после добавления стоп-раствора и считывают ОП или значение поглощения реакционного раствора при 450/650 нм с помощью микропланшет-ридера.Значение OD или значение поглощения пропорционально содержанию HCP в растворе.Исходя из этого, концентрацию ГКП в растворе можно рассчитать по стандартной кривой.
Приложение
Этот набор используется для количественного определения содержания белковых остатков клетки-хозяина CHOK1 в образцах.
Cкомпоненты
| Серийный номер | Компонент | Концентрация | Условия хранения |
| 1 | CHOK1 HCP Стандарт | 0,5 мг/мл | ≤–20℃ |
| 2 | Анти-CHO HCP-HRP | 0,5 мг/мл | ≤–20℃, беречь от света |
| 3 | ТМБ | NA | 2-8℃, защищать от света |
| 4 | 20 × ПБСТ 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Остановить решение | NA | RT |
| 6 | Запайщики микропланшетов | NA | RT |
| 7 | БСА | NA | 2-8℃ |
| 8 | Пластины для предварительного покрытия с высокой адсорбцией | NA | 2-8℃ |
Необходимое оборудование
| Расходные материалы/Оборудование | Производство | Каталог |
| Считыватель микропланшетов | Молекулярные устройства | Spectra Max M5, M5e или эквивалент |
| Термомиксер | Эппендорф | Eppendorf/5355 или аналогичный |
| Вихревой смеситель | ИКА | MS3 Digital или аналогичный |
Хранение и стабильность
1.Транспортировать при температуре -25~-15°C.
2.Условия хранения указаны в таблице 1;компоненты 1–2 хранятся при температуре ≤–20°C, 5–6 хранятся при комнатной температуре, 3、4, 7, 8 хранятся при температуре 2–8 ℃;срок действия 12 месяцев.
Параметры продукта
1.Чувствительность: 1 нг/мл
2.Диапазон обнаружения: 3-100 нг/мл
3.Точность: внутрианализовый CV≤ 10%, межанализовый CV≤ 15%.
4.Охват медицинских услуг: >80%
5.Специфика: Этот набор является универсальным, поскольку он специфически реагирует с CHOK1 HCP независимо от процесса очистки.
Подготовка реагентов
1.ПБСТ 0,05%
Возьмите 15 мл 20×PBST 0,05%, разведенного в ddH.2О, и довел до 300 мл.
2.1,0% БСА
Возьмите 1 г БСА из флакона и разведите в 100 мл 0,05% ФБСТ, хорошо перемешайте до полного растворения и храните при температуре 2–8°С.Приготовленный буфер для разведения действителен в течение 7 дней.Рекомендуется готовить по мере необходимости.
3.Раствор для обнаружения 2 мкг/мл
Возьмите 48 мкл 0,5 мг/мл Anti-CHO HCP-HRP и разбавьте 11 952 мкл 1% BSA, чтобы получить конечную концентрацию раствора для обнаружения 2 мкг/мл.
4.Контроль качества и подготовка стандартов CHOK1 HCP
| Трубка Нет. | Оригинал | Концентрация | Объем | 1% БСА | общий объем | Финал |
| A | Стандартный | 0,5 мг/мл | 10 | 490 | 500 | 10 000 |
| B | A | 10 000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Таблица: Подготовка КК и стандартов
Процедура анализа
1.Подготовьте реагенты, как указано выше в разделе «Приготовление реагентов».
2.Возьмите по 50 мкл стандартов, образцов и средств контроля качества (см. Таблицу 3) в каждую лунку, затем добавьте 100 мкл раствора для обнаружения (2 мкг/мл);Накройте планшет герметиком и поместите планшет ELISA на термомиксер.Инкубируйте при 500 об/мин и температуре 25±3℃ в течение 2 часов.
3.Переверните микропланшет в раковину и выбросьте раствор для покрытия.Внесите пипеткой по 300 мкл 0,05% PBST в каждую лунку, чтобы промыть планшет для ELISA, выбросить раствор и повторить промывание 3 раза.Переверните тарелку на чистое бумажное полотенце и высушите.
4.Добавьте 100 мкл субстрата ТМБ (см. Таблицу 1) в каждую лунку, запечатайте планшет для ИФА и инкубируйте в темноте при температуре 25 ± 3 ℃ в течение 15 минут.
5.Внесите пипеткой по 100 мкл стоп-раствора в каждую лунку.
6.Измерьте поглощение при длине волны 450/650 нм с помощью микропланшет-ридера.
7.Анализируйте данные с помощью SoftMax или аналогичного программного обеспечения.Постройте стандартную кривую с помощью модели логистической регрессии с четырьмя параметрами.
Пример стандартной кривой
ПРИМЕЧАНИЕ. Если концентрация HCP в образце превышает верхний предел стандартной кривой, перед тестированием его необходимо правильно разбавить буфером для разведения.
ПРИМЕЧАНИЯ
Стоп-раствор представляет собой 2М серную кислоту, обращайтесь осторожно, чтобы не разбрызгать!
